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  • 來說一說蛋白酶K都有哪些功能? 2017-03-30

    蛋白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,因而它應(yīng)用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體DNA,蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH4-12.5)均有活性。推薦反應(yīng)緩沖液:50mMTris-HCl(pH7.5),10mMCaCl2。蛋白酶K配制標(biāo)...

  • 如何測定高保真DNA聚合酶的保真度? 2017-03-27

    在PCR實(shí)驗(yàn)中使用適當(dāng)?shù)木酆厦笇⒋_保*的產(chǎn)量和特異性,但市場上有那么多種聚合酶,如何選擇,有時(shí)還真是個(gè)難題。廠家一般都會提供一個(gè)選擇指南,列出每個(gè)產(chǎn)品的特異性、保真度、產(chǎn)量等。保真度是實(shí)驗(yàn)成功zui關(guān)鍵的因素之一,不可不重視。什么是聚合酶保真度?DNA聚合酶的保真度是指準(zhǔn)確復(fù)制目的模板的結(jié)果。具體來說,這涉及到多個(gè)步驟,包括讀取模板鏈,選擇正確的三磷酸核苷,并將此核苷酸插入3’引物末端的能力。為了區(qū)分正確和錯(cuò)誤的核苷酸,一些DNA聚合酶具有3’到5’核酸外切酶活性。這種“校正...

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